采用2′、7′-双-(2-碳氧乙基)-5-(和-6)-碳氢荧光素乙酰乙酰酯(BCECF-AM,invitrogen)比色荧光染色法测定细胞内ph(pHi)。用10 μmol/l血管BCECF-AM对照液在37°C连续血管和浴室灌注10分钟培养CCD。CCDs中的荧光BCECF加载led选择性地加载到间质细胞中,并在每个实验中进行了验证。44 a单色器(Polychrome IV,Till Photonics,Planegg,德国)用于激发。该制剂在436nm处的10ms和490nm处的25ms使基线比接近3。在490/436nm的激发下,phi每2秒测量一次发射比。发射光是通过带有500nm分割光束的二色反射镜收集的,其后跟有520-560nm带通滤波器,并带有预设的相机分割4。一个CCD摄像机(MicroMax,5MHz,美国新泽西州普林斯顿仪器)用于图像采集和数据分析,使用变形/变形(美国宾夕法尼亚州西切斯特的通用成像)。<br><br>这些实验是在荧光信号稳定后进行的,并且整个管的荧光被记录并用于随后的单细胞数据分析。<br><br>通过细胞内碱化(在快速光学cl-去除之后)或细胞内酸化(在快速基底基质cl-去除之后)(从溶液1移至溶液2之后)(图6和7)鉴定了β-间充质细胞。45这种反应与α细胞中观察到的缺席反应(快速腔Cl-去除后)和细胞内碱化(快速基底下Cl-去除后)不同。<br><br>实验溶液:(a)对照含量(以毫米计)118NaCl,1MgSO4,1。3 ca-葡萄糖酸盐,5 d-葡萄糖,0。4 kh2po 4,1。6 k2 HPO 4、25 NaHCO 3;5赫普斯。(b)含有游离Cl-(在毫米内)120Na-葡萄糖酸盐,1MgSO4,4Ca-葡萄糖酸盐,5D-葡萄糖,0。4 kh2po 4,1。6 k2 HPO 4、24 NaHCO 3;5赫普斯。(c)含有游离Na+(以毫米计)125 NMDG,105 HCl,1 MgSO4,1。3 ca-葡萄糖酸盐,5 d-葡萄糖,0。4 H2PO 4,1。6 K2 HPO 4,24胆碱-HCO 3,5 HEPES。所有溶液滴定到ph值7。4在37°C时,先加入NaHCO 3或胆碱-HCO 3,再加入NaOH或HCl。<br><br>在高[K+]存在下利用尼日利亚霉素进行BCECF信号的校准。46为了避免校准曲线中的时间依赖性偏移,校准已在一个单独的校准系列中加载,并启动了cl-去除手动装置。校准溶液(毫米):95 KCl,15 NaCl,0。4 NaH2po 4,1。6 Na2HPO 4,5葡萄糖,1MgCl 2,1。3、Ca-葡萄糖酸盐、25 HEPES、20 NMDG,补充2 μM尼日利辛。该校准溶液滴定至pH 6。五,七。0和7。5日摄氏37度厨房清洁用水、清洁用水、清洁用水、洗碗用水、清洁用水。适用于各种表面。
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